Odyssey XF イメージングシステム

Odyssey XF イメージングシステムは、蛍光ウェスタンブロット実験と化学発光ウェスタンブロット実験を1台で行うことができる冷却CCDカメラタイプのイメージングシステムです。

蛍光／化学発光ウェスタンブロット以外に、クマシー染色タンパク質ゲルの撮影やDNAゲルの撮影も可能で、分子生物学・生化学で求められる基本的なイメージング実験のデータ取得を1台でカバーしています。

「ケミルミだけでなく、定量性と再現性の高い蛍光ウェスタンブロット法を取り入れたい」

「最新の論文投稿規定を満たす定量ウェスタンブロット実験を行うためのエントリーモデルが欲しい」

という方に最適なイメージングシステムです。

なぜ近赤外蛍光？

蛍光ウェスタンブロットのシグナル検出において、どの波長を用いて撮影を行うかは最初に考慮すべき大切なポイントのひとつです。

Red/Green/Blue（RGB）など可視波長の蛍光（可視蛍光）は、メンブレン自体に由来するバックグラウンド（自家蛍光）が大きく、ウェスタンブロット実験で求められる十分な感度を確保することが困難です。

ハウスキーピングタンパク質をはじめとする高発現タンパク質であれば可視蛍光でも十分に検出可能ですが、皆様が研究対象とされているタンパク質を十分なシグナルノイズ比で検出するのは難しいことが多いです。

Odyssey XF イメージングシステムでは、蛍光ウェスタンブロットのシグナル検出に、700nmと800nmの近赤外蛍光波長を用います。

700nm以上の波長の蛍光（近赤外蛍光）では、PVDFメンブレンとニトロセルロースメンブレンともに自家蛍光によるバックグラウンドが著しく小さいことが知られています。そのため、低発現タンパク質の検出に十分な高いシグナルノイズ比を確保できます。

レーザー光源による高感度な蛍光検出

Odyssey XFイメージングシステムは、CCDカメラタイプのイメージャーでありながら、励起光源にLEDではなく半導体レーザーを使用しています（685 nmと785 nm）。

レーザー光源は、LED光源と異なり波長特異性が高いため、励起光の検出側への漏れ込みによるバックグラウンドが少なく、励起パワーも強いという特徴があります。そのため検出感度の点で利点がございます。ほとんどの場合、化学発光法で普通に検出できているバンドは近赤外蛍光法でも問題なく検出していただけます。

また、波長特異性が高いことから、蛍光色素間でのクロストーク（干渉）がミニマムで、2波長同時検出による定量ウェスタンブロット実験を正確に行っていただけます。

LI-COR社では、様々な動物種のIgGに対する 近赤外蛍光標識二次抗体（IRDye標識二次抗体）と合わせて、皆様に実験ソリューションをご提供しています。

サチュレーションから解放されます

蛍光ウェスタンブロッティングは、化学発光法と異なり、基質の枯渇による白抜け（Chemical Saturation）の心配がありません。

さらに、Odyssey XF イメージングシステムは、>6桁の広いダイナミックレンジを持つので、検出器の限界による画像のサチュレーション（Detector Saturation）も起こりません。

右図はダイナミックレンジの違いをバケツの大きさで例えています。ウェスタンブロットでは、ダイナミックレンジが広いことは弱いバンドと強いバンドを露光時間を変えずにワンショットで同時に検出できることを意味します。

そのため、 バンドごとに適した露光時間を探すという今までの苦労から解放されます。

常に均一な条件での画像取得

ダイナミックレンジが広いことにはもう一つの利点がございます。

Odyssey XFでは、1回の撮影で、弱いバンドから強いバンドまですべてのバンドで常に最適な露光が得られます。

これまでのイメージャーのようなIncrement撮影（逐次露光）やAuto-Exposure機能を用いた撮影も不要です。

そのため、撮影毎に露光条件が変わるということがなく、ブロット間や実験間での定量再現性の確保が容易になります。

化学発光法と比較して、定量直線性に優れたデータを、少ない苦労でしかも確実に取得していただけます。

イメージングエリア全域で均一な画像取得

Odyssey XF イメージングシステムには、撮影面全域にわたって均一なレーザー照射を可能にするFieldBrite™ XT2テクノロジーが搭載されています。そのため、撮影面全域でCV < 3%の均一なシグナル取得が可能です。

ブロットを撮影エリアのどこにおいても常に均一なシグナル強度を得られるため、撮影毎にブロットの位置が変わったとしても、定量再現性を損ねることがありません。

また、フラットフィールディングのような撮影後に画像を修正する方法と異なり、生画像（Raw Image）を取得した時点で正確な定量シグナルを取得していただけます。

ウェスタンブロッティングを行われている目的は何ですか？ 定性？ それとも定量？

蛍光ウェスタンブロット法は、化学発光ウェスタンブロット法よりも再現性と定量性に優れ、処理間（実験群間）でのタンパク質発現量の変化（発現比）をより正確かつ確実に定量することができます。

また近年、トップジャーナルを中心に定量ウェスタンブロットデータの論文投稿ガイドラインがアップデートされ、従来よりも厳正な実験を行うことが求められてきています。蛍光ウェスタンブロット法はその最新の論文投稿規定で求められる内容を満たしやすい実験手法です。

「ウェスタンブロッティングには定量性がない」そんな常識をお持ちの方にも試していただきたい優れた検出方法です。

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❷ 異なるタンパク質を同時に検出

化学発光ウェスタンブロットと違い、蛍光ウェスタンブロットでは、一次抗体の動物種を変えることで、複数の異なるタンパク質を1枚のメンブレンから同時に検出することができます。

例えば、ハウスキーピングタンパク質と目的タンパク質を、1枚のメンブレンから同時に検出していただけます。 メンブレンを切って別々のインキュベーション容器で反応させる必要がないため正確なノーマライゼーションが可能で、定量精度を高めることができます。

リン酸化ウェスタンブロットに最適な検出法

このマルチプレックス検出は、リン酸化ウェスタンブロット解析などの翻訳後修飾の解析で特に威力を発揮します。

リン酸化解析では、リン酸化ターゲットのシグナル強度をトータル・ターゲット（リン酸化＋非リン酸化）のシグナル強度で補正します。

この2つのバンドの分子量はほとんど変わらないため、化学発光法ではストリッピングとリプロービングが必須でした。

しかし、蛍光ウェスタンブロット法なら、リプロービングせずに異なる色で別々に同時検出していただけます。

ブラックボックスで正確な抗原検出を損ねる恐れのあるリプロービング実験を行う必要がなく、リン酸化レベルの変化を正確に捉えることができます。

綺麗なウェスタンブロット画像が欲しいですか？

優れた定量データが欲しいですか？

論文掲載のための説得力の高い美しい画像はもちろん重要ですが、最も大切なのは定量データです。

Odyssey XF イメージングシステムには、”次世代画像解析ソフトウェア” Empiria Studioが付属します。

Empiria Studioを用いることで、画像解析における主観性をできる限り排除し、客観的で再現性の高い定量解析が可能になります。

近赤外蛍光ウェスタンブロットに関しては、 近赤外蛍光標識二次抗体（IRDye標識二次抗体）、 ブロッキングバッファー、 抗体希釈液、 総タンパク質染色ノーマライゼーション試薬、 分子量マーカー、 蛍光ウェスタン用ストリッピングバッファーなど、ほとんどの実験ステップの試薬をラインナップしています。

化学発光ウェスタンブロットに関しては、 発光試薬（基質）、 HRP標識二次抗体、有色分子量マーカーの上をなぞることでは発光反応で光る ケミルミペン、 化学発光分子量マーカー、HRPを剥がすのではなく抗体をしっかり剥がす ストリッピングバッファーなど多くの便利で優れた試薬を提供しております。