ウイルスによる細胞変性効果をラベルフリーでハイスループットに測定

Figure reprinted from Journal of Virological Methods, volume 173(2), Fang, Y. et al., “Real-Time Monitoring of Flavivirus Induced Cytopathogenesis Using Cell Electric Impedance Technology,” pages 251–8. Copyright 2011, with permission from Elsevier.

xCELLigence システムによるウイルス力価の測定

図A：Vero細胞に異なるPFUのウェストナイルウイルス液（WNV）をかけて電気抵抗値の変化を長期にわたり追跡しました。上段の図は細胞変性効果のリアルタイムモニタリングです。横軸が時間、縦軸がノーマライズ後の電気抵抗値です。水平方向のラインは50%の細胞が死滅したラインです。下段の図は50%の細胞が死滅するまでに要した時間（CIT50）とPFUのプロットです。

図B：セントルイス脳炎ウイルス（SLEV）を用いて同様の実験を行った結果です。

AとBのどちらの実験でもCIT50がPFUに対して負の相関を持ち、CIT50を用いてウイルスあるいはワクチンの力価を評価できることが示されました。

Figure adapted from Asia Pacific Biotech News, volume 14(10), Lu, H. et al. “Label-free Real-time Cell Based Assay System for Evaluating H1N1 Vaccination Success,” pages 31–32. Copyright 2010, with permission from Asia Pacific Biotech News

xCELLigence システムによる中和試験の測定例

H1N1インフルエンザワクチン接種を受けた2人の被験者（Patient #1と#2）から、ワクチン接種前（0 days）、ワクチン接種7日後（7 days）、ワクチン接種21日後に血清を採取した。血清を精製H1N1インフルエンザワクチンと混合し、E-Plateで培養中の細胞に添加した後、xCELLigenceを用いてそのままモニタリングした。

Patient #2では、ワクチン接種7日後の血清でCPEの著しい遅延が認められ、ワクチン接種7日目の時点で血清中に中和抗体が存在していることがわかる。一方でPatient #1では、ワクチン接種7日目の血清ではCPE遅延がみられず、セロコンバージョンが起きていないことが推察される。

Data adapted from the Journal of Clinical Microbiology, volume 54(8), Piret, J. et al. “Novel Method Based on Real-Time Cell Analysis for Drug Susceptibility Testing of Herpes Simplex Virus and Human Cytomegalovirus.” Copyright 2016, with permission from American Society for Microbiology.

xCELLigence システムによる1型単純ヘルペスウイルス（HSV-1）に対する抗ウイルス薬の薬効評価

E-PlateにVero細胞を播種してコンフルエントまで培養したのちにHSV-1に感染させた。90分後に薬剤を添加してxCELLigenceシステムで抗ウイルス活性をモニタリングした。

左図：野生型HSV-1

右図：アシクロビル耐性変異型HSV-1

アシクロビル耐性変異型HSV-1の細胞変性効果を抑制するには、野生型HSV-1と比べてはるかに高濃度の薬剤添加が必要であることがわかる。本データからそれぞれのEC50を算出した結果、野生型HSV-1の0.8 μMに対し耐性変異型HSV-1におけるEC50は100 μMであった。

Figure reprinted from Veterinary Microbiology, volume 171 (1-2), Coetzee, P. et al. “Viral Replication Kinetics and In Vitro Cytopathogenicity of Parental and Reassortant Strains of Bluetongue Virus Serotype 1, 6 and 8,” pages 53–65. Copyright 2014, with permission from Elsevier.

xCELLigence システムによるウイルスフィットネスの比較

E-PlateにVero細胞を播種してコンフルエントまで培養したのちに特定のMOIでブルータングウイルスを感染させ、xCELLigenceシステムで細胞変性効果をモニタリングした。ゲノム再構成されたブルータングウイルスの複製能つまりフィットネスを親株（Parental）と比較した。xCELLigenceによる経時的データによりエンドポイントアッセイでは難しいウイルス複製能の比較が可能である。

Reprinted from the Journal of Virological Methods, volume 199, Ebersohn, K. et al. “An Improved Method for Determining Virucidal Efficacy of a Chemical Disinfectant Using an Electrical Impedance Assay,” pages 25–28. Copyright 2014, with permission from Elsevier.

xCELLigence システムによる抗ウイルス剤の効能評価

事前に抗ウイルス剤で処理した伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス（IBDV）と処理していないウイルスを、様々な濃度でVero細胞に感染させ、xCELLigenceシステムで細胞変性効果をモニタリングした。抗ウイルス剤処理によりウイルスの細胞変性効果が減弱していることがわかる。それぞれの色のラインの数字はウイルス液の希釈率を示す。